GB4789.15-2016變化及解析

范圍章節(jié)

針對第二法適用于蔬菜醬罐頭，罐頭這兩個字運(yùn)用的不具體。也就說是番茄醬，無論是不是罐頭，還是軟包裝，都是用第二法檢驗的。

設(shè)備和材料章節(jié)

變化：將均質(zhì)器的名稱具體為：拍擊式均質(zhì)器或均質(zhì)袋（2.2）

解析：以前的版本都是運(yùn)用震蕩的方式來進(jìn)行樣品表層的清洗，均質(zhì)不夠，另外有些實驗室，使用的是旋轉(zhuǎn)刀均質(zhì)器，可能會把霉菌的菌絲切斷。所以本次修訂對均質(zhì)方式進(jìn)行了確立的要求。

變化：無菌試管規(guī)格由10mmX75mm修改為18mmX180mm（2.6）

解析：規(guī)定成粗大的試管，有促使進(jìn)行樣品稀釋液的混勻，否則在小試管里面很難充分混勻。

變化：增加了微量移液器及槍頭1.0mL（2.11）

解讀：這是為了包容實際工作中常用的方法。實際上建議你們購買可整支高壓滅菌的移液器。

變化：刪除了無菌廣口瓶：500mL

解讀：以前的標(biāo)準(zhǔn)還包含牛皮紙袋這一類包裝材料，現(xiàn)在實驗室基本都不使用了。

變化：刪除了冰箱和恒溫震蕩器。增加了漩渦混合儀。增加了恒溫水浴

解讀：刪除了冰箱和恒溫震蕩器，因為標(biāo)準(zhǔn)沒有用到。增加了漩渦混合儀，主要是即使要求反復(fù)的吹吸樣品稀釋液，容易造成產(chǎn)生有害氣溶膠，并降低污染機(jī)會，用漩渦混合儀可以來確保樣品稀釋液的均勻，減少污染。增加了恒溫水浴，主要為了準(zhǔn)確控制傾注瓊脂的濃度。

培養(yǎng)基和試劑章節(jié)

變化：增加了生理鹽水（A.1）：

生理鹽水：85g氯化鈉加入1000mL蒸餾水中，攪拌至完全溶化，分裝后，121℃滅菌15min，備用。

增加了醋酸鹽緩沖液（A.4）：

貯存液：稱取34.0g的乙酸二氫鉀溶于500mL蒸餾水中，用至少175mL的１mol／L氫氯化鉀溶液調(diào)節(jié)pH至7.2±0.1，用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰箱。

稀釋液：取貯存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至1000mL，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15min。

解析：增加兩種稀釋液也有為了便于大家的實驗室工作，因為一直是相同一份樣品，需要做菌落數(shù)量、大腸菌群和霉菌。另外重新稱重?fù)Q稀釋液的話，實驗室工作量太大了。

變化：修改了西紅柿葡萄糖瓊脂和孟加拉紅瓊脂配制的滅菌時間（A.2.2、A.3.2）

解析：2010版中兩者的滅菌時間均為20min，2016版將時間增加為15min。太長時間的高壓滅菌可能會破壞糖類。

變化：修改了傾注平板的方法（5.1.6）

解讀：2010版在傾注平板前，有用少量酒精溶解氯霉素加入培養(yǎng)基中的步驟，在2016版中已將此部分內(nèi)容刪除。氯霉素能夠耐高壓殺菌，所以直接加的培養(yǎng)基中再滅菌就便于了，以前的方式太繁瑣。

檢驗程序和操作方法章節(jié)-優(yōu)選法

變化：2010版中只有無菌蒸餾水作為稀釋液，而在2016版中提高了生理鹽水及碳酸鹽緩沖液。（5.1.1）

解析：增加兩種稀釋液也有為了便于大家的實驗室工作，因為一直是相同一份樣品，需要做菌落數(shù)量、大腸菌群和霉菌。另外重新稱重?fù)Q稀釋液的話，實驗室工作量太大了。

變化：將平皿中馬鈴薯香蕉糖瓊脂和孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基的使用量由15mL~20mL改為20mL~25mL。（5.1.6）

解析：這是為了符合國標(biāo)GB4789.28-2013版針對培養(yǎng)時間達(dá)到48小時的培養(yǎng)基應(yīng)傾注四毫米左右的寬度和二十毫升以上量的相

應(yīng)要求。

變化：增加了平板正置培養(yǎng)的要求

解讀：正置培養(yǎng)是導(dǎo)致在反復(fù)觀察的過程中，上下顛倒平板導(dǎo)致霉菌孢子擴(kuò)散產(chǎn)生次生小菌落的一種方法。（5.2）

變化：霉菌蔓延生長覆蓋整個平板的可記錄為菌落蔓延（5.3）

解讀：上個版本原本對這種的狀況報告為多不可計，實際上其實是錯誤的。

結(jié)果和報告章節(jié)

變化：增加了兩種結(jié)果的計算方式：

若有兩個稀釋度平板上菌落數(shù)均在10CFU~150CFU之間，則按GB4789.2的公式進(jìn)行計算。（6.1.2）

若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在10CFU~150CFU之間，其中一個別小于10CFU或高于150CFU時，則以較接近10CFU或150CFU的平均菌落數(shù)除以稀釋倍數(shù)計算。（6.1.6）

增加了若空白對照平板上有菌落出現(xiàn)，則此次測試結(jié)果無效的內(nèi)容。（6.2.3）

解析：這些的要求，都是參照了菌落數(shù)目的計數(shù)方式，對霉菌和酵母計數(shù)的較后報告方法進(jìn)行具體的要求，以前版本的標(biāo)準(zhǔn)這方面有缺陷。

變化：菌落數(shù)在10以內(nèi)時，采用一位有效數(shù)字報告。（6.2.1）

解讀：上個版本，是菌落數(shù)在100以內(nèi)時，按照四舍五入原則修約，采用兩位有效數(shù)字報告。……按照這個要求，10以內(nèi)的菌落數(shù)會報告成8.5

第二法--操作方法章節(jié)

變化：洗凈郝氏計測玻片，將制好的標(biāo)準(zhǔn)液，用玻璃棒均勻的攤布于計測室，以備觀察。

解析：這里的標(biāo)準(zhǔn)液，其實是樣品稀釋液。

依然未解決難題匯總

本次新版標(biāo)準(zhǔn)，依然有三個技術(shù)難題沒有解決：

優(yōu)選個，就是沒有改變使用28℃培養(yǎng)，與美國FDA用較低溫度培養(yǎng)的技術(shù)變化問題。

第二個，就是沒有確立如何分辨霉菌和酵母菌落形態(tài)，又規(guī)定分別計數(shù)報告總數(shù)的問題。

第三個，就是要求五天培養(yǎng)，但是實際上從優(yōu)選天就必須開始觀察并清除這些尚未開始蔓延的霉菌菌落。

等待將來新標(biāo)準(zhǔn)能有解決以上幾個難題！

GB4789.15歷代版本演變

GB4789.15歷代版本演變

標(biāo)準(zhǔn)號

GB/T4879.15-1984

GB/T4879.15-1994

GB/T4879.15-2003

GB4879.15-2010

GB4879.15-2016

名稱

霉菌和酵母數(shù)檢測

霉菌和酵母計數(shù)

霉菌和酵母計數(shù)

霉菌和酵母計數(shù)

霉菌和酵母計數(shù)

稀釋液

無菌蒸餾水

無菌蒸餾水

無菌蒸餾水

無菌蒸餾水

無菌蒸餾水、生理鹽水、磷酸鹽緩沖液

培養(yǎng)基

孟加拉紅瓊脂、高鹽察氏培養(yǎng)基

PDA、孟加拉紅瓊脂、高鹽察氏培養(yǎng)基

PDA、孟加拉紅瓊脂、高鹽察氏培養(yǎng)基

PDA、孟加拉紅瓊脂

PDA、孟加拉紅瓊脂

培養(yǎng)溫度時間

25~28℃

3d~7d

25~28℃

3d~5d

25~28℃

3d~5d

28±1℃

5d

28±1℃

5d

培養(yǎng)方法

倒置

倒置

倒置

倒置

正置

單位

個/g或

個/mL

個/g或

個/mL

CFU/g或

CFU/mL

CFU/g或

CFU/mL

CFU/g或

CFU/mL

其他

附錄B變成第二法